TAIL-PCR（thermal asymmetric interlaced PCR），即交錯式熱不對稱PCR，是一種染色體步移技術（Genome Walking）。該技術通過3個嵌套的特異性引物分別和簡并引物組合進行連續(xù)的PCR循環(huán)，利用不同的退火溫度選擇性地擴增目標片段，所獲得的片段可以直接用做探針標記和測序模板。

原理：

是根據(jù)已知 DNA 序列，分別設計三條同向且退火溫度較高的特異性引物（SP Primer），與經(jīng)過獨特設計的退火溫度較低的兼并引物（可以設計多條，AP1、AP2、AP3……）， 進行熱不對稱 PCR 反應。通常情況下，其中至少有一種兼并引物可以與特異性引物之間利用退火溫度的差異進行熱不對稱 PCR 反應，一般通過三次巢式 PCR 反應即可獲取已知序列的側翼序列。如果一次實驗獲取的長度不能滿足實驗要求時，還可以根據(jù)第一次步移獲取的序列信息，繼續(xù)進行側翼序列獲取。

應用

1. 根據(jù)已知的基因或分子標記連續(xù)步移，獲取人、動物和植物的重要調(diào)控基因，可以用于研究結構基因

的表達調(diào)控。如分離克隆啟動子并對其功能進行研究；

2. 步查獲取新物種中基因的非保守區(qū)域，從而獲得完整的基因序列；

3. 鑒定 T-DNA 或轉座子的插入位點，鑒定基因槍轉基因法等轉基因技術所導致的外源基因的插入位點等；

4. 用于染色體測序工作中的空隙填補，獲得完整的基因組序列；

5. 用于人工染色體 PAC、YAC 和 BAC 的片段搭接。

對于基因組測序已經(jīng)完成的少數(shù)物種（如人、小鼠、線蟲、水稻、擬南芥等）來說，可以輕松地從數(shù)據(jù)

庫中找到某物種已知序列的側翼序列。但是，對于大多數(shù)生物而言，在不了解它們的基因組序列以前，想要知道一個已知區(qū)域兩側的 DNA 序列，只能采用染色體步移技術。 以 PCR 技術為基礎的染色體步移的主要問題是在預先不了解未知區(qū)域序列信息的情況下，如何設計兩個特異性引物來擴增未知區(qū)域。